PCR熒光試劑盒用于檢測動物綠膿桿菌核酸。綠膿桿菌是SPF實驗大、小鼠必須檢測并排除的病原菌之一,因此快速、準確做好實驗動物綠膿桿菌檢測十分重要。基于SYBR Green I染料法的基本原理,綠膿桿菌特異性引物與變性的DNA分子通過PCR反應生成雙鏈DNA,SYBR Green I與雙鏈DNA結合發(fā)出熒光,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步,通過熒光信號,對PCR進程進行實時監(jiān)測。
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。或者使用熒光染料SYBR。SYBR可以結合到雙鏈DNA上面,當體系中的模板被擴增時,SYBR可以有效結合到新合成的雙鏈上面,隨著PCR的進行,結合的SYBR染料越來越多,被儀器檢測到的熒光信號越來越強,從而達到定量的目的。
一般說來,應選用口碑較好的經過大量客戶實驗驗證的PCR熒光試劑盒,因為只有選對了試劑盒才能夠做成漂亮的實驗結果來,特別是對于一些珍貴的樣品更不能因為節(jié)約一些蠅頭小利而破壞了樣品本身。PCR熒光試劑盒在研發(fā)之初就考慮到了一般科研環(huán)境中方方面面的影響,例如我們就光照強度、光照時間對本產品的影響做了嚴苛的實驗論證,得到1ml本產品盛裝于1.5ml離心管中放置在光照強度下可以保存12h,超過12h產品性能則會下降。