日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是流行性乙型腦炎（簡稱乙腦）的病原體。乙腦是嚴(yán)重威脅人畜健康的一種急性傳染病，可引起母豬流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)，病死率高。豬感染JEV病毒后，在血清中能檢測(cè)到特異性抗體。因此檢測(cè)特異性豬乙腦抗體，可作為豬場乙腦疫苗的免疫監(jiān)測(cè)及該病輔助檢測(cè)指標(biāo)。

       本試劑盒采用ELISA方法檢測(cè)豬血清中的特異性抗體。本試劑盒靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，操作方便快速，可分多次使用。

【試劑組成】

【操作程序】

1．洗滌液配制用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號(hào)液）按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。

2．樣本稀釋   用樣本稀釋液（5號(hào)液）將待檢血清樣本按1：100稀釋，如取5ul樣本與495ul樣本稀釋液，混勻。陰性、陽性對(duì)照品不用稀釋，直接加樣。

3．加樣反應(yīng)   每次試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽性及空白對(duì)照各1孔（分別加入陰性、陽性對(duì)照及樣本稀釋液100ul）。樣本檢測(cè)孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘后再甩凈，拍干。

4．加酶反應(yīng)   除空白對(duì)照孔外，每孔加酶結(jié)合物（1號(hào)液） 1滴。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5．顯色反應(yīng)   加底物液（3號(hào)液）和顯色劑（4號(hào)液）各1滴，混勻，37℃避光顯色10分鐘。加終止液（6號(hào)液）1滴，終止反應(yīng)（加終止液后，藍(lán)色會(huì)變?yōu)辄S色）并判讀結(jié)果。

【結(jié)果判斷】

       陰性對(duì)照呈無色或淺黃色，陽性對(duì)照呈明顯黃色，表示試驗(yàn)有效。

       以空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度（A值）。待檢孔A值大于陰性對(duì)照A值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對(duì)照A值的平均值低于0.08時(shí)按0.08計(jì)算。

【注意事項(xiàng)】

1.試劑盒于2-8℃保存，有效期6個(gè)月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。

2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。

3.試劑盒中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號(hào)試劑盒的試劑組份不可混用。

5.試驗(yàn)樣本應(yīng)為無染菌、無血脂、無溶血的血清。任何樣本都應(yīng)視為傳染源妥善處理。

6. 37℃孵育時(shí)，建議使用水浴箱。如無條件，可在溫箱中放置濕盒進(jìn)行反應(yīng)并同時(shí)用不干膠膜封蓋板孔。

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